|
Полімеразна ланцюгова реакція |
Полімеразна ланцюгова реакція є методом швидкого "клонування" певної частини ДНК в пробірці протягом 30-40 циклів.
Полімеразна ланцюгова реакція була винайдена американським біохіміком Кері Мюллисом в 1983 році. Широкий рівень можливостей, дешевизна і простота ПЛР дозволили цим методом знайти застосування в різних областях генетичних досліджень. В основі ПЛР лежить природний процес клітинної реплікації.
Кожен цикл складається з трьох етапів: денатурація, відпал праймерів, синтез ДНК. Для кожного кроку існує спеціальний температурний і часовий інтервал:
1) денатурація (94 °С, 0. 5-1 хв);
2) відпал праймерів (35-65 °С, 0. 5-1 хв);
3) синтез (72 оС, 0. 5-1 хв).
Акуратне виділення ДНК, ампліфікація ДНК, і детекція продуктів ампліфікації (електрофорез) забезпечують високу якість полімеразної ланцюгової реакції. Кількість ампліконів фрагмента ДНК з однієї клітини, утворених під час ПЛР, може бути знайдено за формулою: F = 2n, n-число циклів.
|