Медичні терміни: А Б В Г Д Е Є Ж З І Ї Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Ю Я

Статистика




На порталі: 3
З них гостей: 3
І користувачів: 0
Вибір сайтів рестриктазами

Вибір сайтів рестриктазами

У 1975 році Томас і Девіс виявив, що EcoRI розщеплює ДНК фага в п'яти сайтах пізнавання з різним ступенем інтенсивності, яка може відрізнятися на порядок.  Подібні приклади були зареєстровані і для інших ферментів рестрикції.  Такі фактори, як фланкуючі послідовності, метилированная ДНК і число сайтів розщеплення, по всій видимості, впливають на ефективність розщеплення.  Розщеплення стійких сайтів може бути суттєво покращено за допомогою додавання добре расщепляемой ДНК і олигодезоксирибонуклеотидов, що містять сайт впізнавання, або спермидин. 

Типи рестриктаз:
1) ферменти I-го типу розщеплюють ДНК на ділянках, віддалених від сайту впізнавання; вимагають як АТФ, так і S-аденозил-L-метіонін для функціонування; багатофункціональний білок, здатний як до рестрикції, так і до метилированию;

2) ферменти II типу розщеплюють ДНК у межах або на малих відстанях від конкретного сайту впізнавання, більшості необхідний магній; ферменти, що володіють однією функцією (рестрикційної), не здатні до метилированию;

3) ферменти III типу розщеплюють ДНК в місцях недалеко від сайту впізнавання; вимагають наявності АТФ (але не її гідроліз), S-аденозил-L-метіонін стимулює реакції, але не є обов'язковим; існує як частина комплексу, що включає метилазу;

4) ферменти IV типу розщеплюють метильованих ДНК. 

Зірчаста активність
Рестриктази дізнаються певні нуклеотидні послідовності в молекулах ДНК.  Однак їх сайт-специфічне впізнавання може бути зменшено in vitro.  При певних умовах ферменти можуть розпізнавати і розщеплювати нуклеотидні послідовності, які відрізняються від канонічного сайту.  При низькій іонній силі, наприклад BamHI (з сайтом впізнавання GGATCC) здатна розщеплювати наступні послідовності: NGATCC, GPuATCC і GGNTCC.  Це явище називається «зірчастої активністю».  Для більшості випадків використання рестриктаз зірчаста активність не є бажаною. 

Зірчаста активність є результатом:
1) тривалої інкубації (сверхрозщеплення);
2) висока концентрація ферменту в реакційній суміші;
3) висока концентрація гліцерину в реакційній суміші;
4) наявність в реакційній суміші органічних розчинників, таких як етанол, диметилсульфоксид (ДМСО) або диметилформамід (ДМФА);
5) низька іонна сила реакції буфера;
6) субоптимальне значення рН реакційного буфера;
7) заміна Mg2+ іншими двухвалентными катіонами, такими, як Mn2+ або Co 2+. 

У деяких випадках, продукти ДНК, утворені в ході розщеплення рестриктазою канонічного сайту, стимулюють зірчасті активність ферменту. 

Недостатнє розщеплення ДНК і зірчаста активність призводять до атипових электрофореграммам, за яким при кропіткій вивченні ці два явища можна розрізнити. 
Категорія: Біологія | Переглядів: 1248 | Рейтинг: 0.0/0
Поділіться статтею з іншими:

Акушерство Алергологія Анатомія людини Андрологія
Анестезіологія Біоетика, біобезпека Біологія Валеологія
Венерологія Відпочинок Вірусологія Гастроентерологія
Гематологія Гігієна Гомеопатія Дерматологія
Дієтологія Ендокринологія Епідеміологія Імунологія
Інфекційні хвороби Кардіологія Косметологія Мамологія
МНС Наркологія Невідкладна допомога Неврологія
Нетрадиційна медицина Нефрологія Онкологія Ортопедія
Отоларингологія Офтальмологія Педіатрія Перша допомога
Проктологія Пульмонологія Психіатрія Психологія
Радіологія Сексологія Стоматологія Терапія
Токсикологія Травматологія Шкідливі звички Урологія
Фармакологія Фізіологія Фізична культура Флебологія
Фтизіатрія Хірургія
Корисні лінки: Медичні книги | Медичні обстеження | Анатомія людини