|
Лігазна ланцюгова реакція |
Техніка ампліфікації ДНК, заснована на лигировании олігонуклеотидних зондів.
Зонди призначені для того, щоб з'єднати дві прилеглі послідовності цільової ДНК. Ланцюгова реакція повторюється в три етапи в присутності надлишку зондів: (1) теплова денатурація дволанцюжкової ДНК, (2) відпал зондів (праймерів) на ДНК-мішені, і (3) приєднання зондів термостабильной ДНК-лигазой. Після того як реакція повторюється протягом 20-30 циклів, вимірюється кількість лигированных зондів.
У алель-специфічної ЛЦР використовують чотири олигонуклеотида: два суміжних олигонуклеотида, які унікально поєднуються з одним ланцюгом ДНК-мішені та додаткова пара суміжних олігонуклеотидів, які гибридизируются з протилежного ланцюгом. Лигированные олигонуклеотиды з одного циклу служать матрицею під час наступних циклів.
|